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Protocolos 02 - Soluções para Extração de DNA e PCR

Publicado em 28/02/2016

A seguir protocolos simples de soluções utilizadas nas técnicas de extração de DNA e PCR. Já utilizei todas as soluções para as duas técnicas e obtive excelentes resultados, basta ter atenção na validade dos reagentes e ter atenção ao pH correto. Essas soluções podem ser compradas prontas, mas também podem ser preparadas "in house", o que pode baratear o custo da técnica.

Soluções

1. TBE 5X (Tris-Borato/EDTA)

- Tris ................................................................... 54g
- Ácido Bórico ..................................................... 27,5g
- EDTA 0,5M pH 8,0 .......................................... 20ml
- Água Milli-Q ....................................................... q.s.p. 1000ml

2. EDTA 0,5M pH 8,0
- EDTA dissódico................................................. 37,4g
- Água Milli Q ...................................................... q.s.p 200ml

3. EDTA 0,2M pH 7,4
EDTA 0,5M pH 8,0 ................................................ 40ml
- Acertar o pH.
- Água Milli-Q ....................................................... q.s.p 100ml

4. EDTA 0,2M pH 8,2
- EDTA 0,5M pH 8,0 ........................................... 20ml
- Acertar o pH com NaOH (1N)
- Água Milli-Q .........................................................q.s.p. 50ml

5. Tris – HCl pH 8,0
- Tris base ............................................................ 121,14g
- HCl fumegante .....................................................q.s.p pH 8,0
- Água Milli-Q ..........................................................q.s.p 1000ml

6. Tampão de lise de hemácias (10X)
- Cloreto de amônio (NH4Cl)....................................82,91g
- Bicarbonato de potássio (KHCO3)..........................10,01g
- EDTA 0,2M pH 7,4 ............................................... 50ml
- Água Milli-Q ..........................................................q.s.p 1000ml

7. Tampão de lise nuclear (10X)
- Tris-HCl 1M pH 8,0 ............................................ 20ml
- Cloreto de sódio (NaCl) .........................................46,76g
- EDTA 0,2M pH 8,2 ................................................20ml
- Água Milli-Q ............................................................q.s.p 200ml

8. TE (Tris-EDTA)
- Tris-HCl 1M pH 8,0 ............................................... 1ml
- EDTA 0,2M pH 7,4 .............................................. 0,5ml
- Água Milli-Q ........................................................ q.s.p 100ml

9. Proteinase K (10mg/ml)

- Proteinase K ......................................................... 0,01g
- Água Milli Q autoclavada ...................................... 1ml

10. SDS 10%
- SDS ..........................................................................10g
- Água Milli-Q ..............................................................q.s.p 100ml

11. NaCl saturado (6M)

- Cloreto de sódio (NaCl) .................................................175,2g
- Água Milli-Q ................................................................. q.s.p. 500ml

12. Tampão de amostra (6X)
- Azul de bromofenol ................................................... 0,025g
- Xilenocianol .............................................................. 0,025g
- Glicerol 100% ........................................................... 3g
- Água Milli-Q .............................................................. q.s.p. 10ml

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